《圖書館員》描述一個藏身在倫敦大都會公共圖書館中的古老組織的故事，他們以解決神秘事件、抵抗超自然勢力的侵襲、從全球各地尋找擁有強大魔力的古物為己任。在過去10年內，Flynn Carsen（Noah Wyle）一直擔任該組織的頭面人物「圖書館員」。他負責收集和保護各種古物，避免它們落入壞人之手。可是現在的情況已與以前完全不同，就算Flynn再能干，「圖書館員」的工作也不可能繼續由一個人獨自承擔。為了協助Flynn完成使命，圖書館從全球范圍內雇傭了四名新成員：訓練有素的反恐專家Eve Baird（Rebecca Romijn），她的職責是保護這個團隊的安全，確保他們能活著完成每一項任務；來自俄克拉荷馬州的石油工人Jake Stone（Christian Kane），智商高達190，大腦中就像裝著一本藝術史的百科全書；性格古怪的年輕女人Cassandra（Lindy Booth），在聽覺和「感知幻覺」方面有天賦，擁有「記憶提取」能力——也就是人們常說的「聯覺」（synesthesia）現象；新技術專家Jones（John Kim），不僅迷戀各種尖端科技，也迷戀經典的罪案故事，他很享受在神秘事件中擔當一個「國際人」。壞脾氣的Jenkins（John Larroquette）負責監管這個團隊的工作，他是個古代傳說的專家，對神學、玄學和神秘學了如指掌。幾乎沒有人認識他……因為他長期在圖書館之外工作。這個團隊有許多可怕的敵人，其中最主要的對手是「毒蛇兄弟會」（Serpent Brotherhood）。這是一個由神秘的不死之人Dulaque（Matt Frewer）領導的古老邪教組織。